ELISA實(shí)驗(yàn)中需注意事項(xiàng)及操作步驟!
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)各種問題,如果能提前知道一些關(guān)于elisa實(shí)驗(yàn)的要領(lǐng)就可以正確的避免這些問題的出現(xiàn),BUNSEN本生總結(jié)問題:
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
10、ELISA試劑盒對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行發(fā)作氣泡。加標(biāo)本通常用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以發(fā)作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標(biāo)本,然后在微型震動器上震動1分鐘以保證混和。加酶物使用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程迅速完結(jié)。在雙抗體夾心法測定抗原時(shí),如使用對于抗原分子上兩個(gè)不一樣抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。
ELISA試劑盒則在測守時(shí)可使標(biāo)本的參加和酶標(biāo)抗體的參加兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不光簡化了操作,縮短了反應(yīng)時(shí)間,如使用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也明顯進(jìn)步。單克隆抗體的使用使測定抗原的ELISA試劑盒進(jìn)步到新水平。
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