如何減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素?

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理在我們平時(shí)看來(lái)覺(jué)得很簡(jiǎn)單，無(wú)非就是固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和閉。然而，即使是平常的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在做完實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們是否能獲得有用的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會(huì)直接關(guān)系到結(jié)果的判斷。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的背景因素呢，今天我們一起來(lái)了解。

　　洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無(wú)聊，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　封閉更關(guān)鍵

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。如果您一直被背景問(wèn)題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟Ｒ虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺砑臃忾]液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同。它們與開(kāi)放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。

　　抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。

　　檢測(cè)試劑要適量

　　另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn)：切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高，或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

　　相信在注意這些細(xì)節(jié)后，我們就可以降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素，才可以獲得我們想要的結(jié)果信息。

　　本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。 既能滿(mǎn)足研發(fā)類(lèi)客戶(hù)對(duì)產(chǎn)品種類(lèi)、包裝的特殊要求，也能滿(mǎn)足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。

　　產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等)，ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過(guò)濾器及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。 品種類(lèi)超過(guò)萬(wàn)種，廣泛應(yīng)用于科研院校、中心實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)等科研領(lǐng)域。

　　如何減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素?本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。